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?#31243;?#29983;化试剂的交叉污染问题及其解决方法

时间:2018-03-01 来源:夸克官方

  在生化试剂的应用过程中我们往往会碰到交叉污染的问题,从而导致结果的偏离,影响临床结果的报告和临床病情的诊断。所以正确认识交叉污染问题及有效排除显得尤为重要。

     从仪器角度分析交叉污染的来源主要包括样本针携带污染,试剂针携带污染,搅拌棒携带污染,清洗系统携带污染,比色杯污染。主要原因有:①样品针,试剂针弯曲,特富龙涂层剥落,针堵塞,冲洗水冲?#24202;?#20805;分②搅拌棒特富龙涂层剥落,搅拌棒表面有顽固性污渍,冲洗水冲?#24202;?#23436;全。③比色杯划痕较多,冲洗水冲?#24202;?#23436;全④干燥棒携带污染

 那如何鉴别交叉污染的类型从而及时排除?

 1.样品针携带污染?#21644;?#19968;血清分为五份,分别测定蛋白项目,重复性差

 2.试剂针携带污染:①部分试剂极易变质,可通过肉眼观察发现②以蒸馏水为样

   本,重?#24202;?#23450;以下项目组合10?#25105;?#19978;:AST,ALT(前)+LDH(后);  

   TC(前)+TBA(后),后者测定结果偏高,但重复性好

 3.搅拌棒携带污染:对同一份血清标本重?#24202;?#23450;GGT或ALT或AST20?#25105;?#19978;,结

   果重复性较差且有走高趋势

 4.清洗系统携带污染:①在样本测定过程中,加做室内质控,部分项目测定异常

   或失控②在样本测定过程中以蒸馏水为样本,多次测定LDH,P,Mg,TBA,结果

重复性不好

 5.比色杯污染:在每日开机时对所有项目做试剂空白测定,试剂空白吸光度或

试剂空白吸光度变化率结果变高,TBA(酶循环法)经常出现负值,蛋白项

   目,血脂项目结果偏高,胆红素(钒酸盐法)出现异常值

    

       解决办法:①定期进行仪器维护保养;②按要求及时更换零部件;③定期对仪器进行校准;④全自动生化分析标本和试剂用?#21487;伲?#27531;存少量即会影响测试结果,每天应用无水乙醇擦?#24202;?#23450;期更换干燥棒,保证比色杯清洗后不留残液,避免比色杯的交叉污染。⑤.可使用生化分析仪的试剂针、比色杯清洗程序,对试剂针、比色杯进行2次或多次清洗。用碱性清洗液及酸性清洗液冲洗试剂针可以有效地避免携带污染

 

   从试剂角度分析交叉污染的原因主要以?#24405;?#31181;

1.试剂成分的直接污染:上一个测定试剂中含有下一个测试所要测定的物质,直接干扰下一检测的测定结果。如:淀粉酶(AMY)试剂中含有较高浓度的钙(Ca2+);碱性磷酸酶(ALP)(IFCC法)、肌酸激酶(CK)(NAC法)、肌酸激酶-MB(CK-MB)(NAC法)、二氧化碳(CO2)(PEPC法)、AMY(EPS法)、三酰甘油(TG)等试剂中含有镁(Mg2+);葡萄糖(GLU)(氧化酶法)、总蛋白(TP)与酸性磷酸酶(ACP)试剂中含有较高浓度的钾(K+); 胆碱酯酶(ChE)、总胆固醇(CHOL)、GLU (GOD法)、尿酸(UA)(尿酸酶法)、乳酸脱氢酶(LD)(IFCC法)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)(DGKC法)等试剂中可能含有磷酸缓冲液;CHOL、TG试剂及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂中可能含有胆酸钠;丙氨酸氨基转移酶(ALT)(IFCC法)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)(IFCC法)试剂中含有高活性的LD;以上试剂的交叉污染就分别会对Ca2+、Mg2+、K+(紫外酶法)、磷(P)、总胆汁酸(TBA)及LD的测定结果造成干扰

 

2.试剂成分参与反应:上一个试剂中含有的?#25345;?#35797;剂成分与下一反应所要测定的底物有作用,因而干扰下一反应的测定结果。如:(1)Mg2+测定试剂的络合剂亦能与铁(Fe)结合,影响铁与铁络合剂的结合;(2)直接胆红素(DBil)(重氮法)试剂含有EDTA,Mg2+试剂中含有EGTA,均能与Ca结合,从而影响Ca的测定;(3)以甘油作为酶保护剂的试剂,会对TG的测定带来干扰;(4)钙(MTB法)试剂对K+有负干扰;(5)CHOL试剂中含有胆固醇酯酶,可水解胆固醇酯形成游离胆固醇,而引起对游离胆固醇测定的干扰。

  3.反应进程相同:上一个试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰,下一项?#20811;?#27979;定的是前后两个项目反应的综?#29486;?#29992;结果。如:(1)当上一反应产物为H2O2时,则对以Trinder反应产生颜色的测定结果引起干扰。如UA对CHOL结果的影响;CHOL对肌酐(CREA)(酶法)测定结果的影响;GLU(氧化酶法)对CREA(酶法)测定结果的影响。(2)CK(NAC法)、CK-MB(NAC法)试剂中含有GLU成分,其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶(HK)反应过程,因此可能对GLU的测定带来干扰,尤其对GLU的HK法测定可能带来严重干扰。  

   4.影响反应条件:影响下一个项目的反应条件如pH等,从而改变反应速率。如:(1)DBil(钒酸盐氧化法)试剂中含有表面活性剂的酒石酸盐缓冲液会影响ALT活性,对测定结果有负干扰。(2)CREA(*********速率法)反应条件为碱性,果?#21069;罰?#21160;力学法)反应条件为酸性,受到污染后反应速率会减慢。(3)CREA(酶法)试剂中含有抗坏血酸氧化酶,影响了氧化还原反应的进程,会对TBA(酶循环法)测定结果有影响。

 

   解决方案:1.要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测定原理要了如指掌,对试剂交叉污染的各种可能性加以考虑,合理设计程序。更换试剂时,应仔细研?#20811;得?#20070;,发现和避免可能存在的试剂交叉污染.2.合理?#25165;?#26816;测项目的顺序,在有交叉污染的检测项目中间插入一个或两个非污染项目,最彻底的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前,以消除干扰发生?#30446;?#33021;。3.每个试验项?#20811;?#38656;的样本量,试剂量不要随意同比例降低,以保证反应液有?#27927;?#30340;缓冲能力;4.项目编排顺序要与试剂瓶防止顺序相一致,试剂应尽量选用大容?#31185;?#35013;载。

 

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